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“ACCEPTED" 科研人耳中最动听的词！在科研的征途中，科研想法和得力的研究工具是基石，然而，投稿前后的精心准备、也会成为“加速" 文章发表的金钥匙！核心期刊的投稿指南和要求随着期刊杂志对Western Blot数据的要求日益严格，除了常规的图片质量和分辨率要求，越来越多的审稿人和编辑要求提供完整的实验细节和整膜数据等。在投稿之前，务必仔细阅读期刊的投稿指南和要求，并按要求准备好图片和相关材料，以降低被退回或拒稿的风险。以下是Nature、Cell和JBC这些核心期刊的具体要求，供参考。01 Nature?  强烈反对在不同凝胶/印迹膜之间进行样品的定量比较；若不可避免，图例中必须清晰标注这些样品来源于同一实验或平行实验，并且凝胶/印迹膜是平行处理的；?  对于凝胶中非相邻泳道的重新排列，必须清晰的标记泳道之间的边界，并在图例中详细说明；? 必须确保内参对照(e.g. GAPDH、actin)和目的蛋白在同一张印迹膜上进行。若样品处理对照在不同的凝胶上电泳，必须在图例中进行标注。论文中裁剪的凝胶必须保留所有重要条带；? 避免使用高对比度的凝胶/印迹图，因为过曝可能会掩盖其它条带；? 作者应该仔细检查其手稿是否包含以下内容：i. 检查图表是否有重复；ii. 检查凝胶和印迹膜的泳道拼接情况；iii. 明确样品处理对照和内参对照；iv. 确保提供的原始扫描图与图表对应。02 Cell尽量减少数据采集后的处理，如果确实需要从凝胶/印迹图中删除泳道或以任何形式整合数据，必须清晰的说明这些修改。03 JBCJournal of Biological Chemistry?  JBC要求投稿人在实验方法部分描述所使用抗体的来源、种属信息，包括目录号和批次号。还需要提供数据证明所有抗体的特异性。如果使用了新型抗体，作者需要描述抗体的制备过程，包括抗原/表位的制备和纯化，并提供验证抗体特异性的数据等；?  不建议对Western Blot结果图进行拼接处理，如确实需要从原始印迹图中剪切展示，应在图例中清楚的标注并解释。严禁将不同印迹图的条带拼接在一起；?  避免对Western Blot结果图过度裁剪，保留周边适当背景，特别是图中应完整呈现至少一条(理想状态下多条)位于目的蛋白条带上下方的marker；?  JBC强烈建议作者描述其信号强度定量的方法、如何建立信号强度与抗原载量之间的线性关系及如何在各泳道间校正蛋白上样量。JBC推荐使用考马斯亮蓝、丽春红等蛋白染色试剂对膜进行染色，将信号强度归一化为总蛋白。同时JBC郑重指出，不应使用管家基因作为归一化标准，除非能明确证明实验处理未对管家蛋白的表达产生影响；?  作者应准备好在审稿时向审稿人提供原始的Western Blot数据、试剂验证和定量分析。JBC也保留对所有图像进行数字分析的权利。解读投稿图片的要求越来越多的机构及期刊注重WB的原始数据，比如SCI期刊JOURNAL OF CELLULAR BIOCHEMISTRY (J CELL BIOCHEM) 在“作者须知"里提到“从2020年7月后都必须提供WB等的原始gel/blots图片，且保证重复率，若发现有人为修改的地方一律予以拒稿。"接下来让我们一起解读J CELL BIOCHEM对WB图片的要求。来自J CELL BIOCHEM在图像处理和展示方面重要的原则是最大限度地保持完整的原始免疫印迹。投稿时应向审稿人和编辑提供未剪裁的印迹全扫描图或照片作为补充文件。如下图a展示了一个条带过度饱和的例子，这可能掩盖或至少减弱了样本间的差异。无论是否有统计学意义，不同条带之间的比较和所加的对照应放在同一张膜上。不同膜的印迹结果不可以直接合并到一张图中。如果在一张图中并排了非相邻泳道的印迹膜条带，它们之间应有清晰可见的间隔(如下图b红色虚线框所示)。（图片来源：A brief guide to good practices in pharmacological experiments: Western blotting - PMC (nih.gov)）如有些泳道包含了与研究主题不相关的数据，可从印迹膜中剪去，保留相关的数据(如图c所示)。但据期刊要求，仍需向审稿人或编辑提供完整印迹膜的数据(如图d所示)。在所有的印迹图像上都应显示或标记Marker的分子量位置。如印迹已被水平裁剪，则至少应显示两个相邻的Marker条带的位置(即，在条带的上方和下方，如图c所示)。